VegaCHO&AltairCHO,新一代完全化学成分确定的培养基

2022-02-09


AltairCHOTM&VegaCHOTM系列细胞培养基是奥浦迈全新一代的化学成分确定培养基,不含水解物、蛋白及任何动物来源的成分,尤其适合于中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1、CHOZN、CHO DG44和CHO-S细胞)的大规模、高密度悬浮培养,能够稳定获得更高的抗体/重组蛋白表达。该系列基础培养基与奥浦迈全新开发的下一代高性能补料 VegaCHOTM Feed/AltairCHOTM Feed系列补料联用,可获得更长的细胞存活时间、更高的蛋白/抗体表达量。



细胞驯化


直接接种法

1.对于可以直接接种的细胞,可以从无血清培养基中直接接种到Vega/AltairCHOTM培养基中,接种密度参考传代步骤,并需要依据具体情况而定

2.继续传代细胞,直到细胞稳定生长

3.传代几代之后,细胞密度在接种的3~4天内达到达到2×106 cells/mL、细胞活性≥85%。此时,可以认为细胞已被驯化成功


梯度驯化法

1.对于传统的生长在5~10%血清或无血清的细胞,采用梯度驯化法,接种密度3×10E5~4×10E5 cells/mL

2.监测细胞生长情况,直到细胞密度达到≥3×106 cells/mL

3.用Vega/AltairCHOTM培养基:原始培养基=25:75的比例稀释细胞。直到这个比例的培养基细胞生长良好,再进一步稀释培养。在接下来的每次操作中,提高Vega/AltairCHOTM培养基的比例,如25:75, 50:50, 75:25, 90:10, 100%

4.在完全使用Vega/AltairCHOTM 培养基接种3~4天之后,活细胞计数应该至少达到2×106 cells/mL,细胞活性≥85%。此时,细胞已经驯化到OPM培养基中


细胞复苏

1.在37℃水浴中快速(<2min)融化冷冻的细胞

2.将冷冻管中的细胞液全部转移到125mL含有30mL预温过的Vega/AltairCHOTM培养基的摇瓶中

3.放入37℃,5~8%CO2,转速115~135rpm,湿度80%的摇床中培养

4.复苏后,前两个阶段的细胞密度维持在0.5×106~1×106 cells/ml,之后,按照正常流程进行传代或培养


细胞传代

1.将Vega/AltairCHOTM培养基放入37℃条件下预热20-30min

2.取细胞密度≥1×106 cells/ml、活性≥90%、处于对数生长期中期的细胞进行传代

3.按接种密度为0.5×106 cells/L和最终传代体积,计算所需种子液量

4.无菌转移所需量的种子液至合适体积的摇瓶中,并添加所需体积的已预热的Vega/AltairCHOTM培养基

5.将摇瓶放入温度37℃,湿度80%,转速110-150rpm(振幅50mm),5%-8% CO2的细胞培养摇床中进行培养

6.每2~4天用新鲜的培养基按上述步骤进行传代培养

联系我们

上海市浦东新区紫萍路908弄28号楼

021-2078 0255(总机)

021-6818 2622(销售)

客服邮箱:service@opmbiosciences.com

销售邮箱:order@opmbiosciences.com

请扫描二维码关注奥浦迈官方公众号

Copyright © 2015-2021 上海奥浦迈生物科技股份有限公司 All Rights Reserved. 沪ICP备14035147号