*该页面只支持下载OPM-CHO系列的CoA文件

培养基选择与使用

• 奥浦迈常见CHO基础培养基有哪些，如何选择？
  • 奥浦迈常用CHO基础培养基全部为化学成分确定（CD）培养基，有AltairCHO，VegaCHO，CD07，CD052，CD063，CDP3与CDP9；一般来说这些基础培养基对常见CHO细胞都具有普适性。其中AltairCHO 是最新一代国际一流水准的高性能培养基，专门针对非生长因子依赖的CHO细胞而设计。VegaCHO是专门针对生长因子依赖的CHO细胞而设计，比如CHOZN，同样属于最新一代国际一流水准的高性能培养基。针对于现有进口培养基的替代，我们的CD07，CD063和CDP9更适合CHO K1与CHO-S细胞；CD052与CDP3更适合CHOZN细胞（生长因子依赖）。
• 奥浦迈常见CHO补料培养基有哪些，如何选择？
  • 奥浦迈常用CHO补料培养基全部为化学成分确定（CD）补料。AltairCHO Feed 与VegaCHO Feed是最新一代国际一流水准的高性能补料。另外的化学成分确定的补料有CDF18+CDF26、CDXF01+CDFS08和CDF056V+CDFS06，均适合于针对于现有进口培养基的替代。
• 奥浦迈常见CHO培养基的使用方案
  • 配液及使用方案请见产品手册。测试方案请联系我们的技术支持团队。
• 奥浦迈CHO干粉培养基配制需要注意哪些方面？
  • 配液及使用方案请见产品手册。测试方案请联系我们的技术支持团队。
• 在培养基配制说明中的时间设定是怎么确定的？或者说是否可以提供更详细的时间信息？
  • 配液及使用方案请见产品手册。搅拌时间是在我们QC小量和工艺较大体积多批次配制后定下的经验值，如果水温低，需要适当增加搅拌时间。我们工艺配制50L或100L+培养基时，
    （1）向水中缓慢加入粉末，尽量避免结团，搅拌20min;
    （2）添加NaHCO, 再搅拌20min;
    （3）调酸碱/定容/添加NaCl的操作，每个操作后搅拌5~10 min
• 添加1g/L NaCL至培养基，渗透压会提高多少？
  • 我们渗透压的计算：每添加1g/L NaCL 约增加31.5 mOsm/kg
• 如何避免超浓缩补料析出？
  • 尽量避免pH和温度的强烈波动，配制时的pH尽量高一些，可以到10.8-11.0；也建议使用时不要进大量空气。

细胞相关

• CHO细胞从其他培养基转入奥浦迈培养基，是否需要适应？
  • 细胞驯化方案请见产品手册。简单来说驯化直接适应和间接适应两种，如果原培养基为CD培养基，一般直接适应即可。建议在奥浦迈培养基中传代至少3次，再做后续实验。
• 细胞复苏后一般可以传几代？
  • 需要单克隆传代稳定性数据，一般25代后建议重新复苏。
• 细胞转染后，如何提高单克隆生长？
  • 1.调节CO₂培养箱浓度， 2.用30%条件培养基，3.补加Supplement。
• 细胞复苏，生长稳定后，需要建多少支细胞作为细胞库？
  • 根据不同需求，可以建一级或多级细胞库，每级库30-200支。
• CHO细胞从贴壁驯化至悬浮，会有哪些表现？
  • 贴壁的CHO细胞驯化至悬浮，（1）可能有细胞结团现象；（2）细胞生长的速度一开始也比较慢，可能3天翻一倍甚至更少。需要选一款培养基，如CD07，CD08，CDP3，逐步降血清至完全无血清。继续传代，细胞倍增时间会缩短。
• 奥浦迈培养基内毒素控制在什么范围？
  • （1）基础培养基控制在＜1.0 EU/ml，（2）补料控制在＜10 EU/ml，（3）超浓缩补料因为pH高，对内毒检测有干扰，所以一般只是作为内控，客户有要求的可以写在COA上，如CDFS08
• 奥浦迈对CD培养基的定义是什么，包括Insulin和IgF-1吗？
  • 我们把胰岛素和IgF-1也定义为CD，但培养基里若含有这些成分，我们会明确告知客户。
• 培养基中含胰岛素和IGF-1的区别？
  • 胰岛素和IGF-1的功能相似，都是促进细胞对葡萄糖的利用。胰岛素是一种药物，采购不方便，而且需要检测残留。
• 补料中是否含有谷氨酰胺？
  • 我们的补料中都不含谷氨酰胺；如含有谷氨酰胺，我们会标明。
• 补料中含糖量多少？
  • 补料1中一般含有30-80 g/L糖，具体可以咨询技术支持或工艺部门。补料2不含糖。
• 奥浦迈培养基中是否含有抗结团剂，F68？
  • 大部分CHO培养基中都会含有抗结团剂和F68，CD07和CD08不含抗结团剂。

工艺与产品质量改善

• 一般从哪些方面考虑提高产量？
  • 对于特定的单克隆，一般通过提高细胞密度，延长平台期，提高Qp。
• 一般从哪些方面考虑改善质量？
  • 目前质量方面大多考虑（1）聚体/片段，（2）酸碱峰，（3）糖型：G0，唾液酸，岩藻糖，Man5, 一般从工艺和培养基成分考虑。
• 反应器培养不能重复摇瓶数据，怎么办？
  • 一般是反应器工艺参数设置，细胞株特点等系统问题。奥浦迈提供全方位的技术支持，我们资深的培养基优化和反应器工艺开发专家，以项目组的方式为您解决培养基使用过程中一系列问题。
• 摇瓶、反应器体积和培养基用量的计算？
  • 例如工作体积为3L的反应器，初始体积占70%，即基础培养基2.1L；补料体积占30%，即补料为0.9L（补料1:补料2 = 10:1）；摇瓶一般30ml/125摇瓶，60ml/250ml摇瓶，培养基和补料用量计算方式一样。
• CHO瞬转需要降温吗，会有多大影响？
  • 降温工艺对瞬转的影响：CHO瞬转一般都会选择降温，以抑制空细胞的快速增殖，项目不同影响程度不同（有时可以从约50mg/L提升至约300mg/L）；降低温度有时会减慢产物的生成，需要延长时间。有的项目降温不能显著增加产量。
• Fedbatch过程中一般如何选择接种密度？
  • Fedbatch过程中，常见接种密度为（0.5-1.0）E6/ml，如果细胞迟滞期较长，可以增加接种密度，缩短进入对数生长期的时间。
• 反应器培养工艺哪些可以影响酸峰？
  • Fedbatch过程中，降温和调低pH设定值可以降低酸峰。
• 增加唾液酸，我们用哪个产品？
  • Gal+V2和CDFS05合用，可以提高唾液酸。有案例为3%提高至约10%。
• 降低岩藻糖（Fucose)的产品是哪个，有多大作用？
  • CDFS01可以降低岩藻糖。我们内部有项目数据：基础培养基中添加0.5%，G0F从80%降低至2%，G0从2%提升至64%，对Titer没有影响。
• 摇瓶和反应器的转速设定一般在多少？
  • 摇瓶转速在130-140 rpm; 3L反应器一般在220-250 rpm。
• 流加培养测试时，剩下的种子细胞如何处理？
  • 流加培养剩下的种子需要继续传代，以验证N阶段的种子细胞是否正常，可以帮助分析问题。
• 对于HHL偏高的项目，我们有哪些改进方案？
  • HHL，即少一条轻链的抗体，基本上无法纯化去除，最好控制在1.5%以下。 如果摇瓶或小罐阶段HHL占比超过3%，则最终的纯度很可能低于95%，且工艺较难去除。我们可以较明确地改变培养基成分，送新的基础和补料解决。
• 一般如何通过工艺降低酸峰？
  • 除了培养基成分，一般工艺方面可以通过（1）降温，（2）适当缩短培养周期。
• 客户申报时，会检测ACA（抗细胞结团剂），消泡剂等的残留吗？
  • 一般需要检测消泡剂，筛选压力（如MSX, MTX）的残留，不需要检测ACA。另外，大部分培养基中本身也含有ACA。
• CHO瞬转需要降温吗，会有多大影响？
  • 降温工艺对瞬转的影响：CHO瞬转一般都会选择降温，以抑制空细胞的快速增殖，项目不同影响程度不同（有时可以从约50mg/L提升至约300mg/L）；降低温度有时会减慢产物的生成，需要延长时间。有的项目降温不能显著增加产量。